乙肝病毒及其蛋白成分影响肝星状细胞增殖和细胞外基质表达
作者:admin
来源:用户投稿
时间:2016.3.2
浏览:
7536次
乙肝病毒(HBV)及其蛋白成分对肝星状细胞增殖的影响,及对肝星状细胞的细胞外基质合成和降解的影响,可能与HBV致肝纤维化的机制相关。
我们从HBV转染的HepG2.2.15(人类肝癌细胞株)培养上清液中获得HBV,以HepG2(人类肝癌细胞株)细胞培养上清液为对照。重组乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)蛋白以普通无血清培养基为对照。将含有不同浓度HBV的HepG2.2.15细胞上清液、一定浓度的HBsAg或HBeAg,分别加入LX-2(人类肝星状细胞株)细胞培养基中,持续培养48小时。
用噻唑蓝分析法(MTT)检测HBV、HBsAg及HBeAg对LX-2细胞增殖的影响,并依据MTT检测结果选取高浓度(存活率90%以上)和低浓度(促增殖作用达到平台期)HBV的细胞培养上清液,应用流式细胞仪PI染色及BrdU掺入法,观察HBV、HBsAg及HBeAg对LX-2细胞的细胞周期和增殖的影响。结果显示,不同浓度的HBV、HBsAg及HBeAg均有促进LX-2细胞增殖的作用。
在高、低两种浓度的HBV、HBsAg及HBeAg分别刺激LX-2细胞48小时之后,应用实时荧光定量PCR方法检测LX-2细胞培养上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)及基质金属蛋白酶(MMP-1)的mRNA表达水平,同时应用酶联免疫吸附测定法检测上述指标的蛋白表达水平。
结果显示,高浓度(1.2×105拷贝/ml)HBV作用于LX-2细胞48小时后,可显著促进LX-2细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1和MMP-1的mRNA表达,还可以显著升高TGF-β1、Ⅰ型胶原和TIMP-1的蛋白表达水平(P<0.05)。低浓度(3.9×103拷贝/ml)HBV对TIMP-1的mRNA表达及TIMP-1的蛋白表达作用不明显,余与高浓度HBV作用相似。
高浓度HBsAg可以使TGF-β1和Ⅰ型胶原的mRNA表达水平显著提高(P<0.05),低浓度HBsAg仅可以提高TGF-β1的mRNA表达水平。HBsAg对其他指标的mRNA水平和所有指标的蛋白表达水平均无明显影响。
高浓度HBeAg可以显著升高LX-2细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1和MMP-1的mRNA表达水平,还可以促进TGF-β1、Ⅰ型胶原和TIMP-1的蛋白表达,低浓度HBeAg可以显著升高TGF-β1和TIMP-1的mRNA表达水平及TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白表达水平(P<0.05)。
研究结果提示,在体外培养条件下,HBV及其蛋白成分均可促进肝星状细胞增殖,一定浓度HBV和HBeAg可以使肝星状细胞的细胞外基质(ECM)合成增加,相对较高浓度HBV和HBeAg的上述作用更为明显,而HBsAg对肝星状细胞ECM合成和降解的影响较小。HBV和HBeAg对ECM的降解作用尚不明确,HBV及其蛋白成分影响ECM合成,可能是通过TGF-β1发挥作用。
我们从HBV转染的HepG2.2.15(人类肝癌细胞株)培养上清液中获得HBV,以HepG2(人类肝癌细胞株)细胞培养上清液为对照。重组乙肝病毒表面抗原(HBsAg)和乙肝病毒e抗原(HBeAg)蛋白以普通无血清培养基为对照。将含有不同浓度HBV的HepG2.2.15细胞上清液、一定浓度的HBsAg或HBeAg,分别加入LX-2(人类肝星状细胞株)细胞培养基中,持续培养48小时。
用噻唑蓝分析法(MTT)检测HBV、HBsAg及HBeAg对LX-2细胞增殖的影响,并依据MTT检测结果选取高浓度(存活率90%以上)和低浓度(促增殖作用达到平台期)HBV的细胞培养上清液,应用流式细胞仪PI染色及BrdU掺入法,观察HBV、HBsAg及HBeAg对LX-2细胞的细胞周期和增殖的影响。结果显示,不同浓度的HBV、HBsAg及HBeAg均有促进LX-2细胞增殖的作用。
在高、低两种浓度的HBV、HBsAg及HBeAg分别刺激LX-2细胞48小时之后,应用实时荧光定量PCR方法检测LX-2细胞培养上清液中转化生长因子-β1(TGF-β1)、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、金属蛋白酶组织抑制因子(TIMP-1)及基质金属蛋白酶(MMP-1)的mRNA表达水平,同时应用酶联免疫吸附测定法检测上述指标的蛋白表达水平。
结果显示,高浓度(1.2×105拷贝/ml)HBV作用于LX-2细胞48小时后,可显著促进LX-2细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1和MMP-1的mRNA表达,还可以显著升高TGF-β1、Ⅰ型胶原和TIMP-1的蛋白表达水平(P<0.05)。低浓度(3.9×103拷贝/ml)HBV对TIMP-1的mRNA表达及TIMP-1的蛋白表达作用不明显,余与高浓度HBV作用相似。
高浓度HBsAg可以使TGF-β1和Ⅰ型胶原的mRNA表达水平显著提高(P<0.05),低浓度HBsAg仅可以提高TGF-β1的mRNA表达水平。HBsAg对其他指标的mRNA水平和所有指标的蛋白表达水平均无明显影响。
高浓度HBeAg可以显著升高LX-2细胞TGF-β1、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原、TIMP-1和MMP-1的mRNA表达水平,还可以促进TGF-β1、Ⅰ型胶原和TIMP-1的蛋白表达,低浓度HBeAg可以显著升高TGF-β1和TIMP-1的mRNA表达水平及TGF-β1和Ⅰ型胶原的蛋白表达水平(P<0.05)。
研究结果提示,在体外培养条件下,HBV及其蛋白成分均可促进肝星状细胞增殖,一定浓度HBV和HBeAg可以使肝星状细胞的细胞外基质(ECM)合成增加,相对较高浓度HBV和HBeAg的上述作用更为明显,而HBsAg对肝星状细胞ECM合成和降解的影响较小。HBV和HBeAg对ECM的降解作用尚不明确,HBV及其蛋白成分影响ECM合成,可能是通过TGF-β1发挥作用。
上一篇:恶心、厌油腻小心肝病
- 相关内容延伸阅读 ⇓
- 01. 乙肝加重有十大表现9085
- 02. 乙肝疫苗能持续多久?新生儿注射乙肝疫苗的原则有哪些?12334
- 03. 乙肝小三阳危害大吗7117
- 04. 急性乙肝恢复期的症状表现11578
- 05. 肝脏恶变 有何“表象”?8287
- 06. 乙肝小三阳能生二胎吗?12587
热门阅读
- 01. 四川治疗乙肝最好的医院排行
- 02. 乙肝治疗期间能怀孕吗?
- 03. 总结妊娠对乙肝妈妈的4大影响
- 04. 得了肝囊肿 不必太揪心
- 05. 丙肝抗体阳性不能掉以轻心
- 06. 研究发现两种药物结合可有效阻止肝癌
- 07. 虫草可以养肝护肾
- 08. 肝脏排毒的时间及饮食注意事项
- 09. 治疗肝癌最优秀的方法
- 10. 肝癌的五个症状危害大 右上腹有肿块或是肝癌
图片推荐
乙肝大三阳可以喝红酒吗?
家里备有很多红酒,吃饭的时候会喝;朋友来了也会喝;心情不好的时候自己也会喝点....红酒成为欧阳女士的一部分,但最近去医院体检时发现,自己竟然是乙肝大三阳!医生建议要戒酒,白酒我不喝,那红酒呢?乙肝大
凤翔35岁男子肝硬化 欲网上众筹50万救命钱
35岁的凤翔县男子杨红哲,正值壮年,是家庭的顶梁柱。然而,今年因为肚子痛,杨红哲来到医院检查后,确诊为肝硬化晚期,这个病需要70万元左右。杨红哲无奈之下,想在网上众筹50万医疗费。截至3月21日,已经
乙肝25阳怎么办?
您好,我乙肝五项指标,有一项是有箭头的,第2项乙肝表面抗体,弱阳,滴度2.3,第5项乙肝核心抗体7.96,正常值:<1.00,有的人说我可能是隐性的乙肝病毒携带者,有的说没事,不是乙肝,不知道该相信哪
卫生部副部长黄洁夫为捐肝女孩默哀
11月22日晚,国家卫生部副部长黄洁夫教授在广州军区广州总医院进行肝移植手术之前,和众医护人员一起来到捐肝女孩吴华静的遗体旁举行默哀仪式,深深的鞠躬,包含着的是对生命的无限尊重。黄洁夫副部长与众医护人
佛山4.4万考生报名高考 乙肝表面抗原无需检测
记者昨日从佛山市招生办获悉,今年全市报名高考考生共有44423名,其中异地考生1699人,高考体检将于4月20日结束。 今年高考我市报名考生人数与去年基本持平。市招生办相关负责人表示,今年异地高考全
河南首个慢性肝病预防与控制院士工作站落户省医
2月27日上午,我省首个慢性肝病预防与控制院士工作站揭牌仪式在河南省人民医院举行。浙江大学第一附属医院教授李兰娟院士,省卫计委、省科技厅等相关负责人共同揭开了院士工作站的红盖头。 李兰娟教授是我国首
西医治疗肝硬化的常规方法
肝硬化不及时治疗会并发很多疾病,常见的治疗方法如下: 1、支持治疗,静脉输入高渗葡萄糖液以补充热量,输液中可加入维生素C、胰岛素、氯化钾。注意维持水、电解质、酸碱平衡。病情较重者可输入白蛋白、新鲜血
蘑菇能防癌吗?
蘑菇,属于理想的天然真菌类食品,有很好的营养价值和医疗功效,在饮食推荐上,蘑菇可谓是肝病患者的饮食佳选,那蘑菇能防癌吗? 小小蘑菇能防癌?是的,蘑菇的确有一定防癌、抗癌功效,日常饮食多吃蘑菇,对机体