冬虫夏草对肝纤维化的作用

 冬虫夏草(Cordyceps sinesls Sacc，简称虫草)，为麦角科真菌生在鳞翅目蝙蝠蛾科昆虫蝙蝠蛾上的干燥虫体，系名贵的传统滋补强身中药。冬虫夏草的药用记载量早见于《本草从新》，谓其性“甘平”，有“保肺益肾，止血化痰，已劳嗽”之功效。《药性考》称其“秘精益气，专朴命门”。至《纲目拾遗》始有“周兼士云治蛊胀”之记载。虫草有天然与人工培养之分，人工培育的虫草有虫草菌粉、蝙蝠拟青霉、中国担青霉等多种类型，尽管人工虫草与天然虫草成分不尽一致，但研究表明两者有着相似的药理作用，冬虫夏草多糖(简称虫草多糖)是其主要有效成分之一。

肝硬化的死亡率位于第6位，肝纤维化是其重要病理改变。肝纤维化以肝细胞外基质的增生、沉积为特征，肝炎病毒、血吸虫、酒精、化学毒物等损伤肝脏，均可刺激肝脏细胞炎性细胞分子分泌，细胞增殖旺盛．腔原增生沉积，导致肝纤维化，近年来研究发现天然虫草及人工培葬虫草对肝纤维化有着较好的防治作用。现综述如下。
1 抑制肝炎病毒、减轻肝纤维化发生的诱因
肝炎病毒是人肝纤维化的重要诱因，虫草耐抑制肝炎病毒有着较好的作用。研究衰明．冬虫夏草在体外能抑制己型肝炎病毒的DNA多聚酶(DNAP)，使体外HBVDNA 拷贝减少，并能抑制PLC/PRF/5细胞系分泌HBsAg。能降低感染DHBV幼鸭的DDNAP。邓惠英用冬虫夏草多糖脂质体治疗慢性己型肝炎106例，结果表明，患者肝功能、 球蛋白或HBeAg转阴与对照组相地有显著性差异，用人工虫草制剂治疗慢性肝炎中度患者36例，疗程3个月，发现其可以改善患者的肝功能，并能改善患者的细胞免疫功能。慢性肝毙中虞患者存在CD4+ 下降，CD8+上升情况，经治疗后患者CD4+ 上升，CD8+下降，CD4+ /CD8+比率上升。虫草可激括单核巨噬细胞、T、B淋巴细胞和NK细胞．增强Kupffer细胞的功能，还可以诱生α-干扰素(IFN-α)，抑制病毒mRNA 转录从而达到抑悄HBV 复制的目的 。因此，改善细胞和体液免疫功能，抑制病毒复制是虫草防治病毒性肝毙的机制之一。
2 改善硬化肝的结构与功能
用人工虫草菌丝治疗白蛋白免疫损伤性肝硬化大鼠，结果表明人工虫草能减轻肝脏的炎性细胞浸润和肝细胞变性坏死，Kupffer细胞功能明显增强，免疫复合物IgG-IC在肝内的沉积也显著减少。用人工虫草菌丝治疗CCI4诱导的大鼠肝纤维化，虫草治疗组大鼠血清Ⅲ型前腔原(PCⅢ)水平明显低于对照组，病理检查也显示其肝细胞变性、坏死、纤维组织增生明显轻于对照组，且在实验晚期仍无完整的假小叶形成。免疫组化结果置示治疗组I、Ⅱ、Ⅲ型胶原在肝组织中的沉积亦轻于对照组 。这表明虫草菌丝有较强的促肝细胞修复作用。张荣华等用人工虫草菌丝治疗CCI4诱导的大鼠肝纤维化，观察发现治疗后损伤肝组织中的成纤维细胞及胶原纤维也明显增生，有的区域增生的纤维围绕再生的肝细胞团形成假小叶结构，部分再生的肝细胞再度脂变。这可能与作者所用的虫草菌丝种类不同有关，作者认为虫草菌丝与桃仁配伍可能有较好的抗肝纤维化作用。我们以往用虫草菌丝结合桃仁提取物治疗肝炎后肝硬化，表明两者合用可以纠正机体的免疫功能，提高肝炎后肝硬化患者血清白蛋白水平，使肝、碑静脉的管径有所缩小．提示这种配伍应用能有效降低门静脉压力。治疗前后患者经腹腔镜检查与病理观察均可见肝脏硬度、色泽、表而纤维间隙、镰状韧带水肿有好转迹象，网膜与肠系膜静脉血管曲张减轻，肝细胞变性改善，炎性细胞浸润减少及肝细胞超微结构好转。
3 改善肝脏细胞的功能
当肝实质受损时，肝细胞膜通透性增加，释放出脂质过氧化物等 “损伤因子” ，通过旁分泌作用激活肝星状细胞(hepaticstellate cell，HSC)。杨俊何等观察发现天然与人工虫草制剂均能提高肝组织中超氧化物歧化醇和谷胱甘肽过氧化物酶，降低脂质过氧化物的生成。另外，炎症和细胞免疫反应在纤维增生过程中起着促进作用。是肝纤维发生的重要刺激因素。虫草通过其免疫调节作用改善了肝脏炎症与免疫反应，从而阻止或延缓了这一进程。
肝实质受损时Kupffer细胞也被激括，可释放太量细胞因子包括转化生长因子(transforming growth factor)，TG-α、TGF-β1、血小板衍化生长因子(PDGF)、肿瘤因子-α(tumornecrosisfRctor-α，TNF-α，)以及IL-1、IL-6等．刺激HSC转化、增殖和合成ECM 。其产生的活性氧化及明胶酶B (MMP-9)，均可激活HSC。有研究表明虫草菌丝对Kupffer细胞、巨噬缅胞等功能有增强柞用，影响其细胞因子的分泌，从而在此途径使肝星状细胞激活减少。
HSC位于肝细胞与肝窦内皮细胞之间的Disse腔内。在正常肝脏内，处于静息状态的HSC内含有大量脂滴，其主要功能是储存和代谢视黄醇，参与细胞外基质(extracellular Tnatr ．ECM)的调节转化、调节肝窦血流 肝星状细胞约占间质细胞总量的三分之一。当各种致病因素刺激持续作用于肝脏时，HSC被激活，转变成为肌成纤维细胞(myofibrobtast．MFB)．HSC的活化是肝纤维化的关键。HSC能合成除V型胶原外几乎所有的细胞外基质成分。HSC活化成为MFB后，它可以通过自分泌TGF-β使活化得以持续，即使无炎症因素的持续存在，纤维化过程也会自行不断延续。用虫草菌丝治疗CCl4诱导的大量肝纤维化，结蛋白细胞化学免疫染色表明，第12、14W治疗组大鼠肝组织结蛋白阳性细胞明显低于对照组，第4、8W两组间无明显差异，但可看出治疗组明显低于对照组。表明虫草菌丝不仅能抑制HSC增殖，还能抑制HSC向肌成纤维细胞转化。在体外，虫草菌丝能抑制星状细胞的增殖，并呈剂量依赖性，并抑制HSC的TGF-β1mRNA 的表选与自分泌。
成纤维细胞能大量合成和分泌胶原蛋自、纤维连接蛋白(fibronectin；Fn)、透明质酸(hyMuronic acid，HA)及层粘连蛋白(In nln;LN)等结缔组织成分。因此它的生长增殖对肝纤维化形成有着不可忽视的作用。虫草能明显抑制成纤维细胞表达某些细胞粘附分子 。可见虫草对HSC括化及其TGF-β1自分泌抑制是其抗纤维化的机制之一。
4 调节肝脏细胞外基质代谢
肝纤维化是肝脏细胞外基质代谢紊乱，其生产大于降解，以致胞外基质不断积聚的过程。细胞外基质主要由胶原，非胶原糖蛋白组成，胶原是其主要成分，肝纤维化时肝脏胶原数量增加，其中1型胶原增加最明显．是Ⅲ型胶原的3～4倍，因此，抑制胶原的合成在防治肝纤维化中有重要意义。从虫草治疗CCI1诱导的大鼠肝纤维化的实验中发现，虫草能明显降低血清Ⅲ型前胶原的含量，并减轻肝组织Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ胶原的沉积。以虫草多糖治疗牛血清白蛋白所系的免疫损伤性大鼠肝纤维化，结果表明虫草组大鼠羟脯氨酸含量及Ⅲ型胶原增生较模型组明显减低。虫草对胶原合成与降解均有作用．用虫草多糖质悼治疗CCI致肝纤维化大鼠。结果，治疗组大鼠肝脏中Ⅰ、Ⅲ型胶原蛋白较模型组明显减少，治疗组大鼠肝脏组织Ⅰ、Ⅲ型胶原cmRNA明显下降，有显著性差异，这提示虫草多糖质体可以降低大鼠肝纤维化时Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA的表达。在体外，当虫草多糖浓度为10μg／ml时可显著抑制HSC的Ⅰ、Ⅲ型胶原的mRNA表达，其抑制率分剐为32．6％ 和37．32%。说明通过抑制肝脏胶原的合成可能是虫草抗肝纤维化的机制之一。另有观察表明桃仁提取物、虫草菌丝均可提高杀虫后血吸虫病肝纤维化家兔的胶原酶活性，促进肝内腔原分解代谢，从而使肝内胶原含量减少，达到逆转肝纤维化的目的，而且两药合用时效果量佳。虫草菌丝提高腔原酶活性的作用可能主要在于激活肝内Kupfer细胞，提高其胶原酶分泌量。有学者用虫草多糖(多糖15mg／100g，隔日1次)，治疗CCl4所致肝硬化模型大鼠10W ，结果小剂量虫草脂质体使模型大鼠肝组织中胶原酶mRNA含量增高非常显著。虫草可能通过增加肝组织中胶原酶的含量，而促使胶原降解．
5 调节细胞因子及免疫功能
细胞因子是一些由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的，能介导和调节免疫、炎症反应的小分子多肽。现已证实不少细胞因子，如IFN-γ、TGF-β等与肝纤维化有着密切的关系。虫草对这些细胞因子有着一定的调节作用。
IFN-γ为分子量为21-24K的单体前蛋白，它主要影响Ⅰ、Ⅲ型腔原的合成，使培养的成纤维细胞胶原产量下降。有实验证明IFN-γ能显著减轻汇管区及小叶间肝纤维化程度，抑制HSC活化，显著减少l型胶原与Fn的mRNA表选，抑制肝纤维化的发生。用不同程度的虫草菌丝提取物及饲喂虫草菌丝提取物后的大鼠药物血清培养大鼠Kupffer细胞，结果表明细胞在虫草菌丝提取物及其药物血清作用下，由刀豆素A (ConA)所诱生的IL-1及IFN 和TNF显著增多， 尤以IL-1及IFN 为著，且呈一定的量效关系。也说明虫草菌丝对Kupffer细胞功能有调整作用。用虫草菌丝对肝炎肝硬化患者外周血巨噬细胞体外诱生IFN，发现虫草菌丝能增强ConA 诱生IFN 的作用，不同浓度虫草菌丝作用并不一致，以5mg／ml和10mg／ml最强，过高或过低浓度均无作用。在对大鼠Kupffer细胞诱生IFN的试验中，显示其受虫草菌丝或含虫草菌丝的药物血清刺激后，能明显增强ConA诱生IFN 作用。在肝炎肝硬化患者，其外周血CD4+ /CD8+ 比值、NK细胞括性、IL -2及IFN 的生成均低于正常，经口服虫草多糖脂质体3个月后．患者的外周血CD4+ /CD8+比值、NK细胞活性、IL-2和IFN-α生成均鞍治疗前有显著增高。
TGF-β能促进各种细胞外基质胶原蛋白、Fn、Ln 和蛋白多糖的合成，抑制它们的降解，从而增加ECM 的沉积．在用牛血清白蛋白所致的免疫性大鼠肝纤维化的研究表明TGF-β1，与TGF-βR1表达的增加是免疫性大鼠肝纤维化发生发展机理，虫草对炎症期的肝纤维化有明显的抑制及逆转作用。抑制TGF-β1与TGFβR1的表达及HSC 的括化可能是其抗免疫性肝纤维化的主要机理。由于TGF-β1与TGF-βR1表达减少，刺激HSC等细胞生成ECM 的作用减弱，导致胶原等ECM 生成减少。
TNF-α是一类由单核-巨噬细胞产生的内源性细胞因子。TNF-α可促进肝内星状细胞及肝纤维母细胞的增殖，并促进其向肌纤维母细胞和纤维母细胞的转化。同时，对纤维母细胞及HSC细胞的胶原的合成也有促进作用。Kupffer细胞经虫草孵育24h后，在ConA 的作用下可生成一定量的TNF，但作用较弱。
IL-2为一分子量为14-17kD的糖蛋白，它主要由CD4+ 产生，具有促进T细胞生长、分化，促进B细胞增殖、分化和合成抗体、刺激NK细胞生长，并能诱导杀伤细胞产生IFN-γ、TNF-α等细胞因子。有观察表明，冬虫夏草能刺激单个核细胞分泌TNF-α，并在一定范围内，其刺激单个核细胞生成sIL-2R的水平随冬虫夏草浓度增高而升高，冬虫夏草多糖对ConA刺激的人外周血淋巴细胞分泌IL-2水平有明显促进作用。虫草多糖对体外培养的外周淋巴细胞的IL-2、IFN-γ影响的实验表明，虫草单独或协助PHA诱导IL-2R的表达,促进可溶性m-2R 的生成，但对APH诱生的IL-2、IFN-γ活性有选择性的抑制作用，其协同或抑制作用均呈剂量依赖性。吲哚美辛可部分或全部消除其抑制作用。表明虫草对体外培养的外周淋巴钿囊具有双向调节作用。
综上所述，虫草抗肝纤维化的途径是多层趺、多途径、多靶点的，可以影响肝纤维化的各个阶段，虫草对肝纤维化前期量主要的诱因— — 肝炎病毒有着较好的防治作用。虫草对肝纤维化病理发生的核心— —肝星状细胞的激括有着抑制作用，并能抑制其TGF-β的基因表达与蛋白分泌。在肝纤维化后期，虫草能抑制胶原的合成，促进其降解。然而，我们也看到，虫草抗纤维化的研究还不够系统深入，临床大规模运用的研究资料也较缺乏，虫草的成分复杂，在各个病理环节究竟是哪些主要成分歧重要作用目前还不精楚，各成分之间相互作用如何也不明了。以往的研究中发现，虫草对机体主要趋着免疫调节作用。然而虫草对免疫的调节作用及其对肝纤维化发生、发展的髟响，现在还不清楚。因此．对于虫草抗肝纤维化机制的研究还有待进一步探人。