分辨乙肝病毒标志物

　　临床工作中发现少部分经酶联免疫吸附法（elisa）检测仅乙型肝炎表面抗原（hbsag）和抗-hbc igg阳性的患者，病毒含量却很高。为此，采用时间分辨免疫荧光分析法（trf）对34例此类患者进行乙型肝炎标志物（hbv m）的检查，现将结果报道如下。

　　一、资料与方法

　　1. 病例选择：为2002年2月至9月住院或门诊患者，共34例，男21例，女13例，年龄5～58岁，平均（29.2±18.7）岁。采静脉血分离血清，用elisa进行hbv标志物（hbv m）检测及hbv dna定量检查。留取血清置-30℃保存。(1)hbsag、抗-hbc igg阳性，乙型肝炎e抗原（hbeag）、抗-hbs、抗-hbe、抗-hbc igm阴性；(2)hbv dna含量＞104拷贝/ml；(3)近3个月未使用抗病毒药物。每人进行2次抗原抗体检查，结果一致。2次hbv dna检查，
结果相差1个数量级以下。

　　2. 常规hbv m检测：用elisa法，试剂为上海科华生物工程股份有限公司产品，按产品说明书操作。

　　3. hbv dna含量测定：采用实时荧光定量pcr法，试剂盒购自广州中山医科大学达安基因诊断中心。仪器为美国perkin elmer公司geneamp甈e5700型pcr仪。严格按说明书操作，检测灵敏度为103拷贝/ml。

　　4. trf法检查hbv m：试剂为上海新波生物技术有限公司产品，采用anytest2000时间分辨检测仪。严格按照产品说明书操作。

　　5. 统计分析：取hbv dna含量的对数值进行成组设计的两样本均数比较，行t检验。

　　二、结果

　　1.hbv m：用trf法检查发现，34例患者中hbsag、hbeag、抗-hbc均阳性者15例，hbsag、抗-hbe、抗-hbc均阳性者14例，仅hbsag、抗-hbc阳性者5例。即用elisa检查时hbeag假阴性15例，抗-hbe假阴性14例(表1)。

　　表1  时间分辨免疫荧光发析法检测乙型肝炎标志物结果(x-±s)

　　乙型肝炎标志物   参考值 样本数      浓度 阳性例数 阳性率(%)

　　乙型肝炎表面抗原 0～0.5ng/ml 34 279.19±61.62 34 100.0

　　乙型肝炎表面抗体 0～10mu/ml 34   2.21± 5.60  0 0

　　乙型肝炎e抗原 0～0.03ncu/ml 34   0.15± 0.13 15  44.1

　　乙型肝炎e抗体 0～1.5ncu/ml 34   2.86± 1.29 14  41.2

　　乙型肝炎c抗体 0～0.1ncu/ml 34  11.83± 4.79 34 100.0

　　2.hbv dna含量：hbeag及抗-hbc均阴性组、hbeag阳性组、抗-hbc阳性组hbv dna含量的对数平均值分别为6.45±1.74、7.29±1.59、5.80±1.46。将前者与后两组分别进行成组设计的两样本均数比较的t检验，t值分别为1.005、0.816，p值均>0.05，差异无显著性。

　　三、讨论

　　hbv m的变化是评估hbv感染后病情转归的重要依据，也是抗病毒治疗的疗效考核指标之一。通过trf检查发现，大部分elisa法检测为hbsag、抗-hbc阳性模式的患者其实为hbeag假阴性（15/34，44.12%）及抗-hbe假阴性（14/34，41.18%）。仅少部分可能为病毒变异的结果。研究发现，hbsag、抗-hbc浓度显著高于正常，elisa及trf符合率为100%，抗-hbs浓度明显低于正常，两者符合率为100%。而hbeag、抗-hbe浓度仅稍高于正常，因此elisa易出现假阴性。目前trf主要用于激素的检测。随着仪器及试剂的国产化，检测费用的降低，trf因其突出的高敏感性、特异性强、无放射污染等特点，在hbv m的检测中有着广泛的应用前景。