测量HBV DNA 水平的方法
HBV DNA水平为105 拷贝/ml被认为是活动性肝炎和HBsAg携带状态之间的分界线。另外如上所述,HBV DNA低于105 拷贝/ml通常被认为是产生抗病毒(病毒学)应答的分界线。但值得注意的是,105拷贝/ml这一HBV DNA的临界值是根据制定相关指南当时的HBV DNA检测方法的灵敏度而人为规定的一个水平。随着灵敏度更高的检测方法的出现,现在专家们已经意识到即使患者的HBV DNA水平持续低于105拷贝/ml,肝硬化的并发症仍然在进展。
定量测量患者血中的HBV DNA水平有多种不同的方法。过去的方法包括:
·HCII HBV DNA®捕获杂交法(Digene Corp.)——已不再应用
·Versant HBV DNA 3.0® 法 (Bayer HealthCare Diagnostics)
用某特定方法能检测到的HBV DNA 最小含量被称为该方法的检测下限。当血中的HBV DNA含量降低到某方法的检测下限以下,我们将其称为检测不到(检测阴性)。
更新、灵敏度更高的HBV DNA测量方法利用了一种被称为聚合酶链反应 (Polymerase Chain Reaction,PCR) 的方法。COBAS Amplicor HBV Monitor®(Roche Molecular Systems)是基于PCR技术的一种方法,可检测到低至100拷贝/ml的HBV DNA含量,尽管商业上认可的该方法的检测下限为300拷贝/ml(见表)。
表.不同HBV DNA检测方法的检测下限
方法
检测下限/( 拷贝/ml)
Versant HBV DNA 3.0® Assay
2000 (2.0 ×103)
COBAS Amplicor HBV Monitor®
≤300 (3.0 × 102)
不同检测之间的方法学、动态范围(可测到的HBV DNA水平,从最高到最低)以及DNA的提取方法不同,它们报告的结果单位也不尽相同,这使得对实验室结果和临床试验结果进行比较变得复杂化。因而,世界卫生组织(World Health Organization, WHO)制定了一个HBV DNA 的国际标准。根据这个新标准,HBV DNA检测的结果应以国际单位/毫升样本(IU/ml)的单位报告。
近来有了更为先进的HBV DNA检测系统。一个新的改良是“实时”技术,该方法允许在检测开始后跟踪检测的进行,可定量每一个循环所产生的DNA的量。HBV DNA的实时检测系统和旧的方法相比,具有许多重要的优点:
·操作更方便
·更迅速
·动态范围更广
COBAS TaqManTMHBV test (Roche Diagnostics)正是这样一个系统,在6h内即可完成,检测下限为50拷贝/ml。
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